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ATCC
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ATCC CRL-11268(293T/17), 293T/17, 人胚腎細(xì)胞(SV40T基因修飾）
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Rockefeller Univ.
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人
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胚腎
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正常
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上皮細(xì)胞樣
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貼壁生長(zhǎng)
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DMEM培養(yǎng)基，90%；FBS，10%。
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CRL-11268
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氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37 ℃,
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1：2至1：6，每周2次。
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90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲(chǔ)存
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陰性
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2
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Amelogenin: X
CSF1PO: 11, 12
D13S317: 12, 14
D16S539: 9, 13
D5S818: 8, 9
D7S820: 11
THO1: 7, 9.3
TPOX: 11
vWA: 16, 18, 19
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Sena-Esteves M, et al. Single-step conversion of cells to retrovirus vector producers with herpes simplex virus-Epstein-Barr virus hybrid amplicons. J. Virol. 73: 10426-10439, 1999. PubMed: 10559361
Pensiero M, et al. Retroviral vectors produced by producer cell lines resistant to lysis by human serum. US Patent 5,952,225 dated Sep 14 1999
Pensiero M, et al. Retroviral vectors produced by producer cell lines resistant to lysis by human serum. US Patent 6,329,199 dated Dec 11 2001
Pear WS, et al. Production of High-Titer Helper-Free Retroviruses by Transient Transfection. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 8392-8396, 1993. PubMed: 7690960
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ATCC CRL-11268(293T/17)人胚腎細(xì)胞(SV40T基因修飾）特點(diǎn)和簡(jiǎn)介
293T/17細(xì)胞株是293T (293tsA1609neo)細(xì)胞株的衍生株。 293T 是293細(xì)胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株。 293T細(xì)胞進(jìn)行克隆，檢測(cè)pBND和pZAP載體，得到一株能生成高滴度感染逆轉(zhuǎn)錄病毒的衍生株，293T/17。 細(xì)胞持續(xù)表達(dá)猿病毒40(SV40)大T抗原，而因其高轉(zhuǎn)染能力篩選到17號(hào)克隆。 293T/17細(xì)胞用pCRIPenv-和pCRIPgag-2載體轉(zhuǎn)染得到ANJOU 65 (見(jiàn) ATCC CRL-11269)細(xì)胞株。 ANJOU 65細(xì)胞再用pCRIPgag-2 和 pGPT2E載體轉(zhuǎn)染得到親宅性外殼表達(dá)細(xì)胞株BOSC 23 (見(jiàn) ATCC CRL-11270)。ANJOU 65細(xì)胞用攜帶gpt抗性基因的pCRIPAMgag載體轉(zhuǎn)染得到Bing (見(jiàn) ATCC CRL-11554) 雙向性表達(dá)包裝細(xì)胞株。
ATCC CRL-11268(293T/17)人胚腎細(xì)胞(SV40T基因修飾）接受后處理
1) 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液 ，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2) 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng) 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
4) 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請(qǐng)及 時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
5) 接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是 否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。
ATCC CRL-11268(293T/17)人胚腎細(xì)胞(SV40T基因修飾）培養(yǎng)操作
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。**天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi)；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
ATCC CRL-11268(293T/17)人胚腎細(xì)胞(SV40T基因修飾）培養(yǎng)注意事項(xiàng)
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請(qǐng)及 時(shí)和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細(xì)胞因子 等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn) 題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量 從瓶 壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時(shí),再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均 會(huì)貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán) 染色測(cè)定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常， 請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無(wú)活 力，請(qǐng)拍下 照片及時(shí)和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。
4. 靜置細(xì)胞貼壁后，請(qǐng)將細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng)，待細(xì) 胞匯 合度 80%左右時(shí)正常傳代。
5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞 傳代時(shí)可以 一定比例和客戶(hù)自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和 Procell 技術(shù) 部 溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián) 系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪(fǎng)直至問(wèn)題解決。
7.該細(xì)胞僅供科研使用。
